新型抗HIV-1重组导向制剂SL41在毕赤酵母中的表达及活性实验

• 作者: 于芳 刘玉生 张立树 李子健 李昌 王宏 金宁一 金洪涛
• 来源期刊: 高等学校化学学报
• 学科: 化学
• 关键词: HIV-1 重组导向制剂 单链抗体 金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA) 分泌表达 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2007,（8）
• 页码范围: 1493-1496
• 页数: 4页
• 分类号: O629.73|Q511
• 字数: 2922字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0251-0790.2007.08.013

摘要

以酵母分泌型表达载体pPIC9k为基础,通过一段柔性连接肽Linker构建含有人源化抗HIV-1 gp41单链抗体(ScFv41)和免疫诱导因子葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal enterotoxin A,SEA)的融合表达质粒pPIC9k-SL41,线性化后,采用电转化法整合入巴斯德菌毕赤酵母GS115中,经His+MutS表型鉴定、PCR分析以及G418筛选获得高拷贝重组转化子.摇瓶培养、甲醇诱导表达、SDS-PAGE和Western Blot分析结果表明,目的蛋白得到良好表达,表达量最高可达到47.9 mg/L.目的蛋白经初步纯化后,用于制备的HIV-1感染靶细胞复制模型进行抗体亲和力测定、细胞结合活性测定和细胞杀伤活性研究,结果显示,目的蛋白能够很好地与靶细胞模型中的HIV-1外膜蛋白gp160发生结合反应,并可介导特异的CTL反应,对靶细胞具有明显的杀伤活性,表明获得了具有生物活性的抗HIV-1重组导向制剂.