Ⅱ型登革病毒非结构蛋白NS1的克隆表达及抗体制备

• 作者: 丘立文 潘玉先 狄飙 王新帅 车小燕 陈伟俊
• 来源期刊: 中国公共卫生
• 学科: 医学
• 关键词: 登革病毒 非结构蛋白NS1 克隆 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2007,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1478-1480
• 页数: 3页
• 分类号: R373
• 字数: 3318字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1001-0580.2007.12.036

摘要

目的 克隆表达Ⅱ型登革病毒(dengue virus 2,DV2)非结构蛋白1(DV2-NS1)基因,并制备其单克隆抗体.方法 提取Ⅱ型登革病毒的RNA,扩增其NS1全长基因片段,经TA克隆将NS1基因克隆至pQE30载体中进行诱导表达,表达产物经变性处理后用Ni柱亲和层析纯化并复性,经免疫印迹法(Western Blot)鉴定抗原性.用复性后的NS1蛋白和灭活Ⅱ型登革病毒交替免疫Balb/c小鼠,取小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,杂交瘤细胞经间接ELISA法、间接免疫荧光法(IFA)进行单抗亚类、特异性的筛选与鉴定.结果 携带重组质粒pQE30/DV2-NS1的菌株经诱导,可高效表达重组DV2-NS1蛋白,经复性获得可溶性蛋白,Western Blot证实重组的DV2-NS1蛋白具有抗原性;用重组蛋白和病毒混合免疫,共获得10株抗NS1蛋白的单抗,其中3株为特异性抗DV2-NS1蛋白,与其他3型登革病毒无交叉,另7株为混合交叉型;亚类分析一株为IgG2b,余为IgG1.结论 获得重组Ⅱ型登革病毒非结构蛋白NS1,并得到10株抗DV2-NS1蛋白的杂交瘤细胞株,为进一步研究NS1的生物学特性和临床诊断试剂建立奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	丘立文	南方医科大学珠江医院临床医学基础研究所	23	101	6.0	7.0
2	车小燕	南方医科大学珠江医院临床医学基础研究所	49	197	8.0	9.0
3	潘玉先	南方医科大学珠江医院临床医学基础研究所	12	36	4.0	5.0
4	王新帅	南方医科大学珠江医院临床医学基础研究所	2	6	1.0	2.0
5	狄飙		4	22	3.0	4.0
6	陈伟俊	南方医科大学珠江医院临床医学基础研究所	2	11	2.0	2.0