神经营养肽NP14基因的合成及其在大肠杆菌中的高表达

• 作者: 任凯 姜安丽 孔峰 张之勇 张建业 胡晓燕 苑辉卿 蔡捷
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 神经营养肽 融合蛋白质类 原核表达
• 年，卷（期）: 2007,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2304-2308
• 页数: 5页
• 分类号: R363
• 字数: 3250字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2007.12.004

摘要

目的:根据鞘脂激活蛋白原神经营养序列设计并构建短肽(neurotrophic peptide,NP)多拷贝串连表达载体,利用基因工程的方法制备短肽NP.方法:根据大肠杆菌的偏爱密码子设计并合成NP的碱基片段,通过PCR方法合成串联双拷贝2NP片段,经平端连接克隆到载体pUC18中.利用EcoT14I酶切pUC18-2NP后可产生非镜相对称黏性末端,与表达载体pETEcoT一次连接反应,得到一系列含有不同片段拷贝数的表达载体pETEcoT-multiNP,经PCR-array方法进行阳性克隆筛选、测序鉴定后转化入大肠杆菌BL21(DE3)进行原核表达.结果:经IPTG诱导后,在BL21(DE3)菌中高效表达了2、4、8拷贝融合蛋白,并在每个单拷贝之间加入了溴化氢的切割位点,使融合蛋白切割后能够得到单拷贝的短肽.结论:短肽NP在大肠杆菌中获得高效表达,为进一步研究其生物活性奠定了基础.