两种跨膜蛋白携带myc于细胞表面的能力比较

• 作者: 刘庆军 张兆山 韩化敏 高斌
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 跨膜蛋白 myc抗原决定簇 细胞表面 表达差异
• 年，卷（期）: 2008,（11）
• 所属期刊栏目: 细胞工程
• 页码范围: 1888-1894
• 页数: 7页
• 分类号: Q5
• 字数: 5797字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2008.11.006

摘要

在细胞表面表达具有某种功能的蛋白后,这些细胞就具备了某些新功能,可以对其进行功能研究和应用.将功能蛋白连接到某些跨膜蛋白的胞外区是实现目的蛋白表达于细胞表面的手段之一.本研究比较了2种跨膜蛋白A2TM和△LNGFR携带外源蛋白-myc于细胞表面的能力.利用重叠PCR法合成的A2TM和△LNGFR基因片段与载体pEF/myc/ER和载体LL3.7进行酶切、连接、转化、鉴定,成功构建了pEF-A2TM、pL-A2TM和pL-LN真核表达载体.利用磷酸钙沉淀法转染293FT细胞,荧光显微镜下观察EGFP的表达、流式细胞术检测myc在细胞表面的表达情况,Western blotting检测myc目的蛋白的表达.pL-A2TM和pL-LN转染293FT细胞36 h后的荧光强度基本相同,表明A2TM和△LNGFR在细胞内表达的强度相似.流式细胞术分析显示,△LNGFR和A2TM均可在细胞表面表达,但A2TM只有在指示蛋白EGFP表达非常高的情况下才能在细胞表面被检测到.Western blotting显示△LNGFR表达量很高,而A2TM没有达到检测水平.结果表明,以糖基化形式存在的△LNGFR比没有糖基化的内源A2TM的表达更稳定,A2TM在表达量低时可能易被细胞内的蛋白酶降解,因而△LNGFR是一种能携带外源蛋白于细胞表面的比较理想的跨膜蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘庆军	中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所	7	11	3.0	3.0
3	高斌	中国科学院微生物研究所	8	5	1.0	2.0
4	韩化敏	中国科学院微生物研究所	3	3	1.0	1.0
7	张兆山	中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所	3	5	2.0	2.0