结合单酶切位点的融合PCR技术对SCN1A基因的定点诱变

• 作者: 廖卫平 蔡阳林 赵绮华 龙跃生
• 来源期刊: 激光生物学报
• 学科: 医学
• 关键词: 融合PCR 定点诱变 SCNIA 癫痫
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 技术研究
• 页码范围: 824-828
• 页数: 5页
• 分类号: R742
• 字数: 2799字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7146.2008.06.022

摘要

目的:利用结合单酶切位点的融合PCR技术对癫痫相关基因SCNIA进行定点突变.方法:首先设计两对引物PF1/PR1和PF2/PR2,PF1和PR2均位于突变位点最近的单酶切位点处,而突变位点设计在第一对反向引物(PR1)和第二对正向引物上(PF2).通过重叠延伸法两次PCR扩增:第一次用PF1/PR1和PF2/PR2分开扩增,以扩增产物作模板,PF1/PR2作引物进行融合PCR,得到的扩增产物即含有所需要的突变位点,最后将扩增片段克隆入pMD18-T载体,经测序筛选阳性克隆.结果:DNA测序表明SCN1A基因所编码的第946位密码子由精氨酸(Arg)突变为组氨酸(His),再通过酶切和连接反应将重组质粒上的突变片段替换SCN1A表达质粒上的对应片段,成功构建了SCN1A突变载体.结论:与现在常用的长距离PCR定点诱导突变相比较,结合单酶切位点的融合PCR定点突变技术具备扩增距离短的优点,大大降低了自发突变的概率,适合于大肠杆菌中易自发突变的较大载体的定点诱变.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	廖卫平	广州医学院第二附属医院神经科学研究所	101	787	14.0	24.0
2	赵绮华	广州医学院第二附属医院神经科学研究所	16	121	6.0	10.0
3	龙跃生	广州医学院第二附属医院神经科学研究所	4	15	2.0	3.0
4	蔡阳林	广州医学院第二附属医院神经科学研究所	1	1	1.0	1.0