钠通道SCN1A基因短发夹RNA表达质粒的构建及其在HEK293细胞中的沉默效果

• 作者: 孙卫文 廖卫平 曾涛 赵绮华 龙跃生
• 来源期刊: 南华大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: RNA干扰 钠通道 癫痫
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 257-260
• 页数: 4页
• 分类号: Q7
• 字数: 3311字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1116.2009.03.005

摘要

目的 采用人SCN1A基因非保守区DNA构建短发夹RNA(shRNA)稳定表达的重组质粒,在HEK293细胞中抑制SCN1A基因表达.方法 PCR分别正反向扩增SCN1A基因特异序列,构建成一个绿色光蛋白(GFP)与发夹结构RNA(shRNA)融合表达的重组质粒pEGFP-SCN1A-shRNA;该质粒和对照质粒(pCMV-EGFP)分别与SCN1A基因表达质粒(pCMV-SCN1A)共转染HEK293细胞株,采用半定量RT-PCR及双荧光共定位法鉴定SCN1A基因的表达情况.结果 与对照相比较,shRNA表达质粒转染的培养细胞中SCN1A基因mRNA表达量下调90%;双荧光共定位显示实验组阳性细胞中只检测到GFP蛋白,未能检测到Nav1.1,而对照组阳性细胞中能同时检测到GFP蛋白和Nav1.1.结论 shRNA表达质粒在培养细胞中能有效地抑制SCN1A基因的表达.该质粒可进一步改造成腺病毒表达载体,在动物脑组织中进行永久性表达,建立癫痫等神经系统疾病的动物模型,可望成为致病机理研究和开发新治疗途径的工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	龙跃生		1	0	0.0	0.0
2	孙卫文		1	0	0.0	0.0
3	赵绮华		1	0	0.0	0.0
4	曾涛		1	0	0.0	0.0
5	廖卫平		2	0	0.0	0.0