pEGFP-C1-MCH真核表达载体的构建及其在HEK293细胞系中的表达

• 作者: 侯赋园 徐婧 李竣 杨光忠 王德彬 胡鑫
• 来源期刊: 中南民族大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 黑色素聚焦激素 绿色荧光蛋白 pEGFP-C1 转染 HEK293
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 28-31
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 字数: 3121字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-4321.2018.03.007

摘要

目的:构建pEGFP-C1-MCH真核表达载体,并将其转染入 HEK293细胞中,筛选阳性细胞克隆,为研究MCH基因在能量代谢中的功能及机制提供细胞模型. 方法:提取脑组织总RNA,反转录为cDNA,参照Genbank中提供的序列设计引物扩增MCH基因全长.再将该基因全长cDNA克隆至质粒pEGFP-C1,经菌落PCR筛选及双酶切和DNA测序鉴定,成功构建了含有目的基因MCH的重组质粒pEGFP-C1-MCH. 并利用脂质体2000介导其转染HEK293细胞,用荧光显微镜和RT-PCR检测EGFP和MCH在细胞中的表达.结果:克隆的pEGFP-C1-MCH质粒序列中的MCH与GenBank相符;细胞转染72 h后,转染成功的细胞在荧光显微镜下表达较强的绿色荧光,MCH基因稳定表达.结论:pEGFP-C1-MCH真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的稳定表达,为研究MCH基因在能量代谢中的功能及作用机制提供了实验模型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨光忠	中南民族大学药学院	111	699	15.0	21.0
2	王德彬	中南民族大学药学院	24	58	4.0	6.0
3	徐婧	中南民族大学药学院	21	35	4.0	4.0
4	胡鑫	中南民族大学药学院	16	64	4.0	7.0
5	李竣	中南民族大学药学院	26	56	5.0	6.0
6	侯赋园	中南民族大学药学院	2	3	1.0	1.0