人STAT4基因真核表达载体构建和在HEK293细胞中表达

• 作者: 姚芳玲 李轩岸 范洁琳 雷光华 黄玉梅 黎明
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: STAT4 基因克隆 真核表达
• 年，卷（期）: 2013,（19）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 6-10
• 页数: 5页
• 分类号: R730.2
• 字数: 4123字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建STAT4基因的真核表达载体,在人胚肾细胞系HEK293中表达.方法 设计引物、采用RT-PCR方法从人外周血单个核细胞中获得STAT4的cDNA全长序列,在PCR产物两端加上SalI和BamHI限制性内切酶识别序列,将pEGFP-C1载体和PCR产物用SalI和BamHI进行双酶切,将STAT4 cD-NA定向克隆到pEGFP-C1中,从而构建了重组质粒pEGFP-STAT4;经酶切和测序鉴定正确后,将pEGFP-STAT4体外转染HEK293细胞,瞬时表达带有GFP标签的STAT4融合蛋白；采用荧光显微镜技术和免疫印迹技术检测融合蛋白的表达.结果 RT-PCR扩增了2 247 bp的STAT4 cDNA全长,经测序分析与GenBank中已知序列一致；重组质粒pEGFP-STAT4转染HEK293细胞中,可检测到瞬时表达的GFP-STAT4融合蛋白.结论 成功构建重组质粒pEGFP-STAT4,在真核细胞HEK293中能被表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	雷光华	中南大学湘雅医院骨科	158	1182	18.0	25.0
2	范洁琳	中南大学湘雅医学院	7	63	4.0	7.0
3	黎明	中南大学湘雅医学院 免疫学教研室	66	391	11.0	16.0
4	黄玉梅	中南大学湘雅医学院 免疫学教研室	5	23	2.0	4.0
5	李轩岸	中南大学湘雅医院骨科	2	0	0.0	0.0
6	姚芳玲	中南大学湘雅医学院 免疫学教研室	3	1	1.0	1.0