野生型SLC26A4基因表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达

• 作者: 张国正 戴朴 杨仕明 武健 袁永一
• 来源期刊: 中华耳科学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: SLC26A4 质粒 表达
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 77-81
• 分类号: R349.6|R394.8
• 字数: 4511字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-2922.2011.01.016

摘要

目的 构建含有野生型SLC26A4基因和绿色荧光蛋白基因(pEGFP,enhanced green fluorescent protein)的真核共表达载体,为指导临床SLC26A4相关耳聋的基因诊断及产前诊断奠定实验基础.方法 应用基因重组技术和限制性内切酶酶切及基因测序方法,构建并鉴定pEGFP-SLC26A4真核表达质粒.经脂质体介导转染HEK293细胞系,荧光显微镜下观察pEGFP-SLC26A4真核表达质粒在HEK293细胞系中的表达,利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测SLC26A4 mRNA的表达,利用Western Blot(蛋白印迹)方法 检测Pendrin的表达.结果 阳性重组子经酶切鉴定含有SLC26A4基因片段,基因测序结果与GenBank中SLC26A4序列相同.重组pEGFP-SLC26A4真核表达质粒转入HEK293细胞系后24小时,荧光显微镜下可见绿色荧光表达,RT-PCR能够扩增出SLC26A4的条带,Western Blot检测出87 kDa大小的蛋白.结论 本文成功地构建了含有人全长SLC26A4基因和pEGFP基因的真核共表达载体,且能在哺乳动物HEK293细胞系中表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张国正	河北医科大学第三医院耳鼻咽喉科	4	8	1.0	2.0