突变型SLC26A4基因表达载体的构建及在HELA 细胞中的表达

• 作者: 张勋 张国正 杨仕明 袁永一
• 来源期刊: 中华耳科学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: SLC26A4 质粒 表达
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 内耳相关基础研究专辑
• 页码范围: 264-268
• 分类号: R349.7
• 字数: 3387字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-2922.2011.03.006

摘要

目的 构建含有突变型SLC26A4基因和绿色荧光蛋白基因(PEGFP)的真核共表达载体,为指导临床SLC26A4相关耳聋的基因诊断及产前诊断奠定实验基础.方法 通过快速定点诱变试剂盒定点突变SLC26A4基因,应用基因重组技术和限制性内切酶酶切,及基因测序方法,构建并鉴定PEGFP-SLC26A4 (1517T＞G)真核表达质粒.经脂质体介导转染HELA细胞系,共聚焦显微镜下观察突变型pEGFP-SLC26A4( 1517T＞G)真核表达质粒在HELA细胞系中的表达.结果 阳性重组子经酶切鉴定含有突变型SL C26A4基因片段,基因测序结果正确.重组突变型PEGFP- SLC26A4 (1517T＞G)真核表达质粒转入HELA细胞系后24小时,荧光显微镜下可见绿色荧光表达,并且在细胞膜和胞浆内都有表达.结论 本文成功地构建了突变型SLC26A4基因(1517T＞G)和PEGFP基因的真核共表达载体,且能在HELA细胞系中表达.荧光显微镜下可见细胞膜和胞浆内都有表达,提示该突变型表达蛋白的转运功能可能发生了改变.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨仕明	解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科医院解放军耳鼻咽喉研究所	143	712	12.0	20.0
2	张国正	解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科医院解放军耳鼻咽喉研究所	1	0	0.0	0.0
6	张勋	河北医科大学第三医院耳鼻咽喉科	42	149	7.0	10.0
7	袁永一	解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科医院解放军耳鼻咽喉研究所	33	220	8.0	14.0