人Ndfip1和Nedd4的原核表达,纯化和抗体制备

• 作者: 张勇 朱大海 菅记涌 黄守均
• 来源期刊: 生命科学研究
• 学科: 医学
• 关键词: Ndfip1 Nedd4 肢带型肌营养不良 抗体
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 40-44
• 页数: 5页
• 分类号: Q78|R392
• 字数: 3388字
• 语种: 中文

摘要

为了进一步从蛋白水平上检测Ndfip1(Nedd4 family interacting protein 1)和Nedd4(Neuronal precursor cell-expressed developmentally down-resulated 4)在肢带型肌营养不良(Limb-girdle muscular dystrophy,LGMD)患者的肌肉组织中的表达及功能,以正常人的脑和肾脏组织的总RNA为模板,RT-PCR扩增Ndfip1和Nedd4部分编码序列,构建原核表达重组质粒pET28b-hNdfip1和pET28b-hNedd4,转化大肠杆菌BL21后,加IPTG诱导蛋白表达,Ni-NTA层析柱纯化蛋白,免疫BALB/c小鼠制备抗体.Western blot检测显示抗体能识别人和小鼠的Ndfip1和Nedd4,小鼠各组织中Ndfip1的蛋白表达谱与文献报道的Ndrip1 mRNA表达谱不一致,暗示Ndfip1具有转录和翻译水平的调控.