靶向Arnt的RNAi慢病毒载体的构建及其在HCCLM6中对Arnt基因表达的影响

• 作者: 吴伟忠 夏景林 孙惠川 张宁 李薇薇 梁英 王鲁
• 来源期刊: 中国临床医学
• 学科: 医学
• 关键词: Arnt RNA干扰 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 其他
• 页码范围: 879-882
• 页数: 4页
• 分类号: R735.7
• 字数: 3612字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-6358.2008.06.060

摘要

目的:构建并鉴定Arnt基因特异性RNAi慢病毒栽体,将其导入HCCLM6肝癌细胞中,筛选有效抑制ARNT表达的稳定细胞株.方法:针对已经筛选确定的Arnt基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的OligoDNA,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ酶切后的pLVTHM载体连接[含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]产生LV-shArnt慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.用LV-shArnt载体,pCMV-dR8.74载体,pMD2G载体三质粒共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白表达水平测定病毒滴度,挑选细胞克隆,收获病毒上清,将病毒上清转染HCCLM6中,经过GFP筛选得到稳定抑制Arnt表达的HCCLM6细胞株.通过RT-PCR鉴定抑制Arnt表达的效果.结果:双酶切与测序鉴定证实成功构建了Arnt shRNA的慢病毒栽体,转染包装病毒细胞株获得的病毒上清成功转染了HCCLM6,并且抑制了Arnt的表达.结论:运用pLVTHM载体构建的LV-shArnt慢病毒载体可有效抑制Arnt在肝癌细胞株HCCLM6中的表达,为观察转染shRNA慢病毒表达载体的肿瘤细胞的恶性生物学行为变化奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙惠川	复旦大学附属中山医院肝癌研究所	61	286	10.0	13.0
2	王鲁	复旦大学附属中山医院肝癌研究所	62	287	10.0	14.0
3	夏景林	复旦大学附属中山医院肝癌研究所	52	426	12.0	18.0
4	张宁	复旦大学附属中山医院肝癌研究所	36	71	6.0	7.0
5	吴伟忠	复旦大学附属中山医院肝癌研究所	24	85	6.0	8.0
6	梁英	复旦大学附属中山医院肝癌研究所	4	8	1.0	2.0
7	李薇薇	复旦大学附属中山医院肝癌研究所	4	11	2.0	3.0