利用修饰的随机引物构建非洲爪蟾酵母双杂交定向cDNA文库

• 作者: 孔清华 李朝翠 武景阳 毛炳宇
• 来源期刊: 动物学研究
• 学科: 生物学
• 关键词: 非洲爪蟾:酵母双杂交 随机引物 定向cDNA文库
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 分子生物学与进货
• 页码范围: 368-372
• 页数: 5页
• 分类号: Q343.1|Q78|Q959.5
• 字数: 3405字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0254-5853.2008.04.003

摘要

描述了一种新的构建cDNA文库的方法,其中用来合成cDNA第一链的随机引物5'-端被加上碱基d(AC),在cDNA双链合成后所添加的连接头的末端含有碱基d(GTCG).在cDNA舣链3'-端,连接头连接上后会形成一个完整的Sall酶切位点d(GTCGAC),而在5'-端几乎不会形成Sall位点.在Sall酶切后利用形成的3'-粘性末端与5'-EcoRI粘性末端一起将cDNA双链定向导入线性化的质粒载体,再通过转化细菌获得cDNA文库.利用此方法构建了一个不同发育时期非洲爪蟾胚胎酵母双杂交cDNA文库.检测了文库中空载体的比例,插入片段大小和不同基因的表达水平几个指标,都符合预期,但是同时发现定位于mRNA的3'-端的插入片段比例比较低.这种倾向性符合文献报道,应该是实验系统的倾向性,不影响进一步的酵母双杂交实验.这些数据证明成功地构建了定向非洲爪蟾酵母双杂交cDNA文库.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	毛炳宇	中国科学院昆明动物研究所遗传资源与进化国家重点实验室	5	11	3.0	3.0
2	李朝翠	中国科学院昆明动物研究所遗传资源与进化国家重点实验室	3	16	3.0	3.0
3	武景阳	中国科学院昆明动物研究所遗传资源与进化国家重点实验室	1	4	1.0	1.0
7	孔清华	中国科学院昆明动物研究所遗传资源与进化国家重点实验室	1	4	1.0	1.0