靶向EphB4基因的shRNA真核表达载体的构建与鉴定

• 作者: 张艳荣 惠国桢 胡锦 董万利
• 来源期刊: 苏州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: EphB4 短发夹RNA 恶性胶质瘤 载体构建
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 349-352
• 页数: 4页
• 分类号: R739.41
• 字数: 2851字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-0399.2008.03.002

摘要

目的 构建和鉴定靶向EphB4基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体.方法 体外合成一对互补并编码靶向EphB4基因的特异性shRNA序列的寡核苷酸,克隆到经Bbs Ⅰ酶切线性化的psiRNA人H1启动子质粒载体中,经酶切和测序鉴定所构建的重组载体是否正确;采用脂质体转染的方法将构建的重组载体导入人恶性胶质瘤细胞系U251中,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染细胞EphB4mRNA的表达变化.结果 经酶切和测序证明,pH1-EphB4-shRNA序列正确;转染pH1-EphB4-shRNA载体后,U251细胞EphB4基因的电泳条带明显减弱,在磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)参比下较空载体组下降60%.结论 靶向EphB4基因的shRNA真核表达载体构建成功,转染U251细胞之后获得稳定表达,并可特异性沉默EphB4基因的表达,为进一步研究EphB4基因在恶性胶质瘤的发生发展中的作用提供了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	惠国桢	苏州大学附属第一医院神经外科	226	1343	18.0	25.0
2	董万利	苏州大学附属第一医院神经内科	192	792	13.0	17.0
3	张艳荣	苏州大学附属第一医院神经内科	3	11	2.0	3.0
4	胡锦	上海交通大学附属第六人民医院神经外科	36	209	8.0	11.0