人乳头瘤病毒18型E2基因的原核表达载体构建与表达

• 作者: 杨国成 柳长柏 黄发军
• 来源期刊: 湖北民族学院学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 人乳头瘤病毒 E2蛋白 宫颈癌
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 10-13
• 页数: 4页
• 分类号: R373.9
• 字数: 3319字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-8164.2008.02.003

摘要

目的 将人乳头瘤病毒18型(Human papillomavirus 18, HPV18) E2基因插入到原核表达载体pET28a(+)T7启动子下游,构建原核表达载体pET28a(+)-HPV18E2,原核表达并纯化HPV18E2蛋白,为研究HPV18 E2蛋白相关疫苗奠定实验基础.方法 1)以HPV18型基因组DNA为模板,运用聚合酶链反应扩增E2基因,将其插入到原核表达载体pET28a(+)中,构建重组表达质粒pET28a(+)-HPV18E2;2) PCR、限制性内切酶切分析以及核酸序列测定重组质粒pET28a(+)-HPV18E2的正确性;3)将重组表达质粒pET28a(+)-HPV18E2转化大肠杆菌BL21(DE3), IPTG诱导表达,经镍螯合亲和层析胶体纯化HPV18E2蛋白;4)十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blot)鉴定HPV18E2蛋白的正确表达.结果 1) PCR、限制性内切酶切分析和核酸序列分析鉴定证实了重组表达质粒pET28a(+)-HPV18E2的成功构建;2) SDS-PAGE电泳分析, HPV18E2蛋白在大肠杆菌BL21中表达量占菌体总蛋白的21%,纯化后的蛋白纯度大于90%;经Western blot鉴定,显示HPV18E2蛋白与标签蛋白(6xHis)形成相对分子质量约42KD的蛋白,与理论预计值相符.结论 1)成功构建了原核表达载体pET28a(+)-HPV18E2;2)原核表达获得了HPV18E2蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	柳长柏	三峡大学分子生物学研究所	56	96	5.0	7.0
2	杨国成	武汉大学医学院	11	42	4.0	5.0
3	黄发军	武汉大学医学院	1	1	1.0	1.0