幽门螺杆菌双价亚单位分子内佐剂疫苗的构建表达与纯化

• 作者: 刘开云 张卫军 解庆华 邹全明 郭刚
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 幽门螺杆菌 不耐热肠毒素B亚单位 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2008,（17）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1587-1590
• 页数: 4页
• 分类号: R378|R392-33|R392.7
• 字数: 3653字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2008.17.001

摘要

目的 克隆表达幽门螺杆菌外膜蛋白烷基过氧化氢还原酶ahpC、ureB414功能片段基因,与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位构建融合基因ahpC-ureB414-ltB(aul).方法 采用重叠延伸PCR的方法,以AhpC做为融合蛋白前端,与UreB414功能片段及黏膜佐剂ltB依次串联,在片段间引入5个氨基酸的柔性Linker GGGGS进行连接;将融合基因构建在原核表达载体pET-22b(+)中,经酶切及测序鉴定后转化宿主菌E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白ahpC-UreB414.ltB(AUL).融合蛋白经AKTA-explore纯化仪纯化融合蛋白.结果 PCR扩增出1 350 bp的目的 基因片段aul,工程菌pET22b-aul/BL21经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示有新生的蛋白表达条带,相对分子质量约为50×103,与预期值一致,目的 蛋白约占菌体总蛋白的28.7%,重组蛋白用Ni2+-NTA树脂提纯.纯化后的蛋白质经SDS-PAGE分析可见单一条带,图像软件分析表明纯度可达85%以上.Western blot显示重组蛋白质具有良好的免疫反应性.结论 成功构建、表达融合蛋白rAUL,纯化后的融合蛋白保持各亚单位组分及佐剂的独立免疫反应性.