肺组织特异性基因HIMF的克隆及其真核表达载体的构建

• 作者: 刘媛 童强松 董继华 蒋国松 蔡嘉斌 郑丽端
• 来源期刊: 华中科技大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 缺氧诱导丝裂原因子 组织特异性 肺 基因表达
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 431-434
• 页数: 4页
• 分类号: Q782
• 字数: 3466字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-0741.2008.04.003

摘要

目的 克隆小鼠肺组织特异性表达基因缺氧诱导丝裂原因子(hypoxia-induced itogenic factor,HIMF),并构建其真核表达载体.方法 采用 Western blot 法检测 HIMF 基因在小鼠不同脏器中的表达;从小鼠肺组织中提取总RNA,采用 RT-PCR 法扩增全长 HIMF cDNA ,克隆至 T 载体后进行核酸序列分析,并将其正向插入到真核表达载体pcDNA3.1/Zeo(+)的限制性内切酶位点 EcoR Ⅰ ;重组子在阳离子脂质体 Lipofectamine 2000 的介导下瞬时转染胚胎纤维母细胞 NIH/3T3、肺Ⅱ型上皮细胞 MLE-12、血管内皮细胞 SVEC4-10,用 Western blot 及 RT-PCR 法检测细胞HIMF表达水平.结果 HIMF特异性表达于小鼠肺组织,而其他脏器未见表达.成功克隆了小鼠 HIMF 全长 cDNA(336 bp),与 GenBank 报道的序列一致.真核表达载体 pcDNA3.1-HIMF 转染细胞后,细胞内 HIMF mRNA 和蛋白水平均显著增高(P<0.01).结论 从小鼠肺组织中克隆出 HIMF 这一组织特异性基因,为深入研究 HIMF 的生物学功能及其在肺部疾病靶向性生物治疗中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	童强松	华中科技大学同济医学院附属协和医院小儿外科	55	401	11.0	17.0
2	董继华	华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室	70	396	11.0	16.0
3	郑丽端	华中科技大学同济医学院附属协和医院病理科	47	335	10.0	17.0
4	蒋国松	华中科技大学同济医学院附属协和医院小儿外科	31	126	6.0	10.0
5	刘媛	华中科技大学同济医学院附属协和医院小儿外科	28	210	10.0	13.0
6	蔡嘉斌	华中科技大学同济医学院附属协和医院小儿外科	5	41	3.0	5.0