牛IgG2Fc受体(boFcγ2R)胞外区基因原核表达载体的构建及其表达

• 作者: 何礼洋 南楠 席俊 张利娜 张改平 朱礼倩 李学伍 邓瑞广
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 牛Fcγ2R 胞外区基因 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 178-180
• 页数: 3页
• 分类号: Q786
• 字数: 3074字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2008.02.028

摘要

目的:构建牛Fcγ2R胞外区基因的原核表达载体,并在E.coli BL21(DE3)中表达.方法:提取健康成年牛的白细胞总RNA,经RT-PCR扩增牛Fcγ2R胞外区基因片段,并将其克隆到载体pGEM-T Easy,经限制性内切酶EcoR I和 Not I双酶切鉴定及序列测定后,再将其亚克隆入原核表达载体pET28a中,构建重组质粒pET-2R,转化E.coli BL21(DE3)经IPTG诱导表达组氨酸融合蛋白.结果:获得682 bp的编码牛Fcγ2R胞外区基因片段.以构建的重组质粒pET-2R转化E.coli BL21(DE3)后,经IPTG诱导,表达出相对分子质量(Mr)约为30 000的重组蛋白.SDS-PAGE分析显示,表达的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于E.coli BL21(DE3)的胞质中,Western blot检测表明该蛋白能和牛IgG2结合.结论:成功地构建了原核表达载体pET-2R,并表达出重组蛋白.为研究牛IgG和受体的相互作用机制及其介导的免疫反应打下了基础.