牛nanog基原核表达载体构建及其在大肠杆菌中的表达

• 作者: 云彦 王华岩 窦忠英 胡勇策 郑喜邦
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: nanog 分子克隆 原核表达 牛
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 770-774
• 页数: 5页
• 分类号: S188
• 字数: 3942字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2008.05.008

摘要

从6周龄的胎牛(Bos taurus)原始生殖嵴中提取总RNA,通过RT-PCR扩增nanog基因,将其克隆到PMD-18T载体,然后再亚克隆到pGEX-KG表达载体上,获得原核表达质粒pGEx-KG-nanog,限制性内切酶分析和DNA测序证明所插入片段为牛nanog基因编码序列.重组质粒转化大肠杆菌JM109(Escherichia coli),在不同的培养温度(25、30和37℃)和不同浓度的IPTG(0.10、0.25、0.50、1.00和2.00mmol/L)诱导下均获得了表达,结果表明,培养温度和IPTG浓度对GST-Nanog融合蛋白在大肠杆菌中的表达影响甚微;经Western blot检测证实该蛋白约60kD,并具有GST抗原活性,证实目的蛋白为Nanog蛋白.