重组人钙网蛋白的克隆与原核表达

• 作者: 曹春雨 王艳林 韩钰
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 钙网蛋白 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 70-73
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 字数: 2264字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8135.2008.04.014

摘要

目的:克隆人钙网蛋白(calreticulin,CRT)并进行原核表达和纯化.方法:采用RT-PCR 法从人非小细胞肺腺癌A549细胞总RNA中克隆人钙网蛋白cDNA,构建CRT原核表达质粒(pET-15b/CRT)并转化E.coli的Rossetta菌株.IPTG诱导后,表达蛋白在变性条件下经Ni-NTA 树脂亲和层析纯化,然后透析复性.分别用SDS-PAGE和Western blotting鉴定CRT表达和纯化状态.结果:从A549细胞总RNA中成功获得人CRT cDNA克隆,重组质粒pET-15b/CRT构建正确.转化pET-15b/CRT的E.coli Rossetta诱导性表达重组人CRT蛋白,该蛋白可经Ni-NTA树脂亲和层析高度纯化.结论:成功建立了CRT原核表达和纯化的实验方法,该方法为后续的CRT蛋白功能研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩钰	三峡大学医学院分子生物学研究所	71	175	7.0	9.0
2	王艳林	三峡大学医学院分子生物学研究所	137	424	11.0	16.0
3	曹春雨	三峡大学医学院分子生物学研究所	40	68	5.0	7.0