RNAi抑制PrP表达载体的构建及其在PrP功能研究中的初步应用

• 作者: 乔俊文 周向梅 尹晓敏 李玉荣 杨建民 赵德明
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: RNAi C6细胞 朊蛋白 表达 超氧化物歧化酶
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 337-342
• 页数: 6页
• 分类号: S852.65+9.7
• 字数: 4113字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2008.03.015

摘要

本文旨在构建有效抑制朊蛋白(Prion protein,PrP)表达的重组质粒,并以此为工具控制PrP表达,从而探讨PrP对细胞SOD活性的影响.设计并化学合成1对含有发夹结构的寡核苷酸片段(shPrP),退火后与表达载体pG-super(Hairpin siRNA expressing vector)定向连接,构建重组质粒 pG-super-shPrP.对重组子进行PCR鉴定,测序正确后,脂质体法转染C6细胞,采用实时荧光定量RT-PCR检测PrP mRNA的表达水平,以验证 pC-super-shPrP的抑制效率;结果表明:重组质粒 pG-super-shPrP 构建成功,且显著降低C6细胞PrP mRNA表达(P<0.05),抑制效率为 34.2%.利用 pG-super、pG-super-shPrP 分别转染C6细胞,并检测细胞SOD总活性及SOD表达水平,探讨PrP对细胞SOD活性的影响及其作用机制,结果表明PrP促进细胞SOD的活性(P<0.01),但对细胞SOD的表达量无影响,即PrP对SOD活性的促进作用与SOD1的表达量无关.本研究在成功构建了PrP的RNA 干扰表达质粒的基础上,利用此质粒,在细胞水平上揭示了PrP对细胞SOD活性的促进作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李玉荣	中国农业大学动物医学院国家动物传染性海绵状脑病实验室	37	168	8.0	11.0
5	杨建民	中国农业大学动物医学院国家动物传染性海绵状脑病实验室	56	254	9.0	13.0
6	尹晓敏	中国农业大学动物医学院国家动物传染性海绵状脑病实验室	32	46	3.0	5.0
7	周向梅	中国农业大学动物医学院国家动物传染性海绵状脑病实验室	100	213	8.0	12.0
8	乔俊文	中国农业大学动物医学院国家动物传染性海绵状脑病实验室	9	27	3.0	5.0