单链抗体A7基因真核表达载体的构建

• 作者: 孟繁平 李强 李红花 李英信 李辉 穆永佳 韩晓敏 魏晶
• 来源期刊: 延边大学医学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 重症肌无力 抗体 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 5-9
• 页数: 5页
• 分类号: R392.1
• 字数: 2985字
• 语种: 中文

摘要

[目的]构建抗乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体A7基因的真核表达载体,为单链抗体A7基因的真核表达及基因治疗重症肌无力奠定基础.[方法]应用PCR技术,从已构建的含有抗乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体A7基因的重组原核表达载体pHEN2单链抗体A7上扩增单链抗体A7基因并纯化,将纯化后的PCR产物经EcoRⅠ和AvrⅡ双酶切后,用低熔点琼脂糖凝胶电泳回收并纯化,再与经同样酶切并纯化的真核表达载体pPIC9K连接,将其产物转化至大肠杆菌DH5α后扩增,再用AvrⅡ和EcoRⅠ酶切和测定序列检查ScFvA7基因插入的准确性. [结果]构建pPIC9K-ScFvA7重组载体,经序列测定检查核苷酸序列正确,且ScFvA7基因准确地克隆至载体开放读码框架内.[结论]成功地构建了抗乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体A7基因的真核表达载体.