人组织因子在毕赤酵母中的表达和纯化

• 作者: 于敏 宋后燕 王羽雄 顾银良
• 来源期刊: 复旦学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 组织因子 外源性凝血 毕赤酵母 凝血酶原时间
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 811-814
• 页数: 4页
• 分类号: Q784
• 字数: 3028字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-8467.2008.06.004

摘要

目的 制备具有凝血活性的重组人组织因子(recombinant tissue factor,r-TF)用于构建PT试剂盒.方法 将人组织因子胞外区编码基因与酵母表达载体重组,构建酵母表达质粒pPIC9K-TF,利用电穿孔法转化宿主菌Pichia pastoris GS115,转化子经G418抗性筛选后,获得高表达克隆.工程菌在摇瓶中经甲醇诱导,表达r-TF,表达产物经纯化后,鉴定生物活性.结果 SDS-PAGE证实表达产物的分子量为37 000～45 000,Western blot证明其为人组织因子衍生物,纯化后,r-TF经脂化后,具有促凝血活性,为研制凝血活酶时间测定试剂盒及研究TF的构效关系创造条件.结论 用毕赤酵母高效表达具有活性的rTF,表达量达到182 mg/L.纯化工艺简便易行,蛋白回收率高,纯化后的rTF可用于组装PT测定试剂盒.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋后燕	复旦大学上海医学院分子医学教育部重点实验室	94	467	12.0	17.0
2	王羽雄	复旦大学上海医学院分子医学教育部重点实验室	5	8	2.0	2.0
3	于敏	复旦大学上海医学院分子医学教育部重点实验室	15	11	2.0	3.0
4	顾银良	复旦大学上海医学院分子医学教育部重点实验室	4	11	3.0	3.0