重组sCR1在毕赤酵母细胞中的表达、纯化及鉴定

• 作者: 刘亚利 刘琰 宫璀璀 王广兰 王文丽 邰苏豫
• 来源期刊: 河南医学研究
• 学科: 医学
• 关键词: 毕赤酵母细胞 酵母载体 可溶性补体受体1 蛋白表达
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11
• 字数: 3991字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-437X.2008.01.001

摘要

目的:酵母细胞SMD 1168表达人sCRI,并对重组蛋白进行纯化.方法:从人外周血中提取总RNA,应用RT-PCR获得人sCRI全长eDNA,将其克隆入真核表达载体pPIC9K,构建含人sCRI的重组质粒(pPIC9K-sCRI);经测序鉴定正确后,将重组质粒转化入毕赤酵母菌细胞SMD 1168中,经甲醇诱导,表达产物经SDS-PAGE分析及Western blot鉴定,并通过Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化.结果:经甲醇诱导的含pPIC9K-sCRl的酵母细胞表达出重组人sCRI的融合蛋白,48～72 h sCR1融合蛋白表达量最高.此蛋白在凝胶上表现为Mr大于31 KDa的蛋白区带,在Western blot分析中可被sCRl的CD35单克隆抗体(mAb)识别.经Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化后得到较纯的sCRI融合蛋白.结论:人sCRI融合蛋白在酵母细胞表达系统中的高水平表达,并且有与人体天然蛋白相同的抗原活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王文丽	解放军第153中心医院济南军区检验中心	14	33	4.0	5.0
2	宫璀璀	解放军第153中心医院济南军区检验中心	21	54	5.0	6.0
3	刘琰	解放军第153中心医院济南军区检验中心	3	9	1.0	3.0
4	王广兰	解放军第153中心医院济南军区检验中心	13	10	2.0	2.0
5	刘亚利	解放军第153中心医院济南军区检验中心	11	6	2.0	2.0
6	邰苏豫	解放军第153中心医院济南军区检验中心	2	0	0.0	0.0