亲和标记DAB389 (Gly4Ser)2-αMSH重组蛋白的构建、表达及纯化

• 作者: 岳玉环 张国利 朱平 李泽鸿
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 生物学
• 关键词: 亲和标记His-tag DAB389(Gly4Ser)2-αMSH 重组蛋白 基因表达 免疫毒素类 白喉毒素
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 241-244
• 页数: 4页
• 分类号: Q591.2
• 字数: 4005字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2008.03.010

摘要

目的:构建含有亲和标记His-tag的DAB389 (Gly4Ser)2-αMSH重组蛋白,便于融合蛋白质的纯化.方法:利用含有His-tag序列、Factor Xa酶切识别序列、白喉毒素N端序列的基因作上游引物,含有αMSH全序列和(Gly4Ser)2互补序列基因作下游引物,以pET28a/DAB389(Gly4Ser)2EGF为模板,PCR扩增目的基因片段,并插入到原核表达载体pET28a中,构建了重组表达载体pET28a/亲和标记DAB389(Gly4Ser)2-αMSH,融合蛋白在BL21(λDE3)中以可溶形式表达,通过硫酸铵盐析、亲和层析纯化、脱盐、Factor Xa酶切得到重组蛋白纯品.结果:扩增的片段与理论值一致,序列分析正确;目的蛋白表达量约占菌体总蛋白量的30.6%;纯化得到纯度为94.36%的重组蛋白.结论:成功构建了含有His-tag的DAB389 (Gly4Ser)2-αMSH重组蛋白,减少了纯化步骤,为进一步研究重组毒素、简便纯化途径奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张国利	军事医学科学院军事兽医研究所	29	67	4.0	6.0
2	岳玉环	军事医学科学院军事兽医研究所	21	60	5.0	6.0
3	朱平	军事医学科学院军事兽医研究所	29	90	5.0	7.0
4	李泽鸿	吉林农业大学生命科学学院	65	401	12.0	17.0