小亚璃眼蜱4D8基因的克隆与原核表达

• 作者: 刘爱红 曾巧英 李有全 殷宏 罗建勋 赵金国
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 小亚璃眼蜱 4D8基因 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 病原生物学
• 页码范围: 461-464
• 页数: 4页
• 分类号: S852.746|Q786
• 字数: 3598字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2008.06.002

摘要

根据GenBank上登录的边缘革蜱4D8基因序列设计1对引物,采用PCR技术自半饱血小亚璃眼蜱雌性成蜱唾液腺cDNA表达文库中扩增获得了4D8基因;将其连入pMD18-T载体,构建重组克隆载体pMD18-Hyaa4D8.测序分析表明,克隆的小亚璃眼蜱4D8基因与边缘革蜱4D8基因的核苷酸序列的同源性为89.2%.将此片段定向亚克隆到原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组原核表达载体pGEX-4T-1-Hyaa4D8,表达并纯化重组蛋白,通过免疫印迹试验鉴定该重组蛋白的生物学活性.结果显示,该重组蛋白是分子质量为45ku的融合蛋白,且表达产物能被半饱血小亚璃眼蜱雌性成蜱唾液腺抗原免疫兔血清识别.