口蹄疫病毒非结构蛋白3A、3B和2C基因的表达及产物纯化与活性检测

• 作者: 付元芳 刘在新 卢曾军 张小丽 才学鹏 曹轶梅 田美娜 郭建宏
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 口蹄疫病毒 非结构蛋白 酶联免疫电转移印迹技术(EITB)
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 侵染和免疫
• 页码范围: 790-795
• 页数: 6页
• 分类号: Q939
• 字数: 4568字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0001-6209.2008.06.014

摘要

[目的]口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白(NSP)3A、3B和2C基因的表达及产物纯化与活性检测.[方法]利用原核表达系统表达了FMDV NSP 3A、3B和富含B细胞抗原位点序列的2C蛋白.利用高浓度尿素裂解包涵体,采用稀释法和氧化型、还原型谷胱甘肽系统相结合方法对2C蛋白进行复性.用金属鳌合亲合层析的方法对表达的FMDV NSP 3A、3B和2C进行纯化.采用ELISA方法对比检测了3种纯化蛋白在检测羊血清NSP抗体的效果.[结果]检测得知3A和3B为可溶性表达蛋白,2C以包涵体形式表达.通过Western-blot分析,表明纯化后蛋白能与FMDV感染动物血清发生特异性反应.纯化的3A、3B和复性后的2C融合蛋白与3ABC抗原的检测结果具有很高的符合性.[结论]该研究为建立鉴别FMDV自然感染动物和灭活疫苗免疫动物的酶联免疫电转移印迹技术(EITB)提供了所需的材料.