不结球白菜L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶基因(GLDH)cDNA片段克隆与RNAi表达载体构建

• 作者: 侯喜林 宋玉萍 李英 马成英 高红亮
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 不结球白菜 GLDH基因 RNAi植物双元表达载体
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 页码范围: 20-24
• 页数: 5页
• 分类号: S634.3
• 字数: 3621字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-2030.2008.04.004

摘要

根据植物中hpRNA(hairpin RNA)原理,选择GLDH基因cDNA序列同源性较低区域设计1对携带双酶切位点的特异引物,以不结球白菜'苏州青'叶片为材料提取总RNA,利用RT-PCR技术克隆了GLDH基因片段.构建中间克隆载体,经过3次亚克隆将测序正确的GLDH基因片段分别以正向和反向两种形式插入到间隔基因YYT的两端,经鉴定已插入到植物表达载体中,成功地构建了干扰GLDH基因表达的RNAi植物双元表达载体pRNAi-GLDH,并将表达载体转化到农杆菌菌株LBA4404中,为深入研究GLDH基因功能提供有效的工具.