盐穗木醛脱氢酶基因HcALDH7A1原核表达载体的构建及蛋白诱导表达与优化

• 作者: 宋策 戴玲玲 曾幼玲 黄世平
• 来源期刊: 新疆农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 盐穗木 醛脱氢酶ALDH7A1 原核表达
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 页码范围: 1510-1516
• 页数: 7页
• 分类号: Q786|S188
• 字数: 4022字
• 语种: 中文
• DOI: 10.6048/j.issn.1001-4330.2015.08.023

摘要

[目的]为构建盐穗木盐响应基因HcALDH7A1的原核表达载体并进行外源基因的诱导表达和优化.[方法]以实验室已构建好的p mD18-T Simple-HcALDH7A1/DH5α(Pst Ⅰ,SacⅠ)重组载体中盐穗木醛脱氢酶基因(HcALDH7A1)为模板,设计带有酶切位点(EcoRⅠ,XhoⅠ)的引物通过PCR扩增亚克隆到p mD18-TSimple vector中,测序鉴定正确后,通过EcoRⅠ和Xho Ⅰ双酶切,构建重组的原核表达载体pET28a-HcALDH7 A1.将鉴定正确的重组质粒转化到大肠杆菌Transetta(DE3)中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE检测目的蛋白表达,并对其表达体系进行优化.[结果]成功构建盐穗木醛脱氢酶基因HcALDH7A1的原核表达载体,诱导HcALDH7A1外源基因表达蛋白优化的最佳条件为IPTG终浓度为0.6 mmol/L,30℃诱导时间为4h.融合蛋白分子量大小为61 kD.[结论]成功在大肠杆菌体内诱导表达盐穗木醛脱氢酶HcALDH7A1基因,并明确目的蛋白的最佳表达条件.为后续在原核表达系统大肠杆菌细胞中探索盐穗木HcALDH7A1的生物和非生物胁迫的功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曾幼玲	新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室	52	427	11.0	19.0
2	黄世平	新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室	2	6	1.0	2.0
3	戴玲玲	新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室	1	0	0.0	0.0
4	宋策	新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室	1	0	0.0	0.0