ΦC31整合酶的表达、纯化及多克隆抗体的制备

• 作者: CHEN Jin-zhong LI Zhi-hui XU Zheng-xin 张茂祥 王秋娟
• 来源期刊: 中国药科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: Φ31整合酶 蛋白表达 多克隆抗体 纯化
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 352-357
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 4873字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5048.2008.04.013

摘要

目的:提供ΦC31整合酶研究所需的大量纯化蛋白质及特异性抗体.方法:将编码ΦC31整合酶的ORF插入到pET22b+载体构建表达质粒并转化E.coli B121(DE3),用IPTG诱导表达His-C31整合酶融合蛋白,His-Bind Quick Cartridge纯化表达产物.重组蛋白作为抗原常规免疫家兔制备相应的多克隆抗体,Western blotting确定抗体的特异性,体外线性底物分子内重组检测系统检测抗体的活性.最后用该抗体检测了ΦC31整合酶在真核细胞HEK293中的定位和分布.结果:16℃条件下0.2 mmol/L IPTG诱导培养30 h,携带pET22b-ΦC31质粒的E.coli BL21(DE3)在YTG培养基中,可表达出大量的融合蛋白,该蛋白经体外线性底物分子内重组检测系统检验具有较高的活性.使用该融合蛋白免疫新西兰大白兔后.分离兔血清可得到ΦC31整合酶多克隆抗体,Western blotting和荧光免疫细胞组织化学方法证实,该抗体可特异性地识别细菌及细胞表达的ΦC31整合酶蛋白抗原.结论:本实验建立了表达ΦC31整合酶的方法,并成功制备了ΦC31整合酶特异性抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王秋娟	中国药科大学生理学教研室	109	1575	23.0	34.0
2	XU Zheng-xin	复旦大学遗传所基因治疗国家重点实验室	1	1	1.0	1.0
3	张茂祥	中国药科大学生理学教研室	1	1	1.0	1.0
4	LI Zhi-hui	复旦大学遗传所基因治疗国家重点实验室	1	1	1.0	1.0
5	CHEN Jin-zhong	复旦大学遗传所基因治疗国家重点实验室	1	1	1.0	1.0