HIV-1整合酶142-288氨基酸蛋白的表达、纯化及抗原性鉴定

• 作者: 叶德富 姚小剑 陈君敏 顾园园
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 人类免疫缺陷病毒Ⅰ型 整合酶 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2008,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 616-620
• 页数: 5页
• 分类号: R372.9
• 字数: 3564字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2008.07.006

摘要

目的 构建人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)整合酶(IN)142-288氨基酸蛋白的原核表达系统,对其进行表达、纯化及抗原性评价.方法 采用PER方法以野生型HIV-1 IN表达质粒为模板扩增IN142-288氨基酸cDNA片段.BamH Ⅰ与Xho Ⅰ双酶切消化后连接到表达载体pGEX一4T1中.构建pGEX-4T1-IN142-288质粒,并进行双酶切与测序鉴定.将该质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3).经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物经液相层析纯化.将纯化后的IN142-288蛋白免疫BALB/c小鼠,对其抗原性进行评价.结果 pGEX-4T1-IN142-288质粒经过双酶切后可见清晰的载体条带和438bp插入的外源基因片段.SDS-PAGE和Western-blot方法对纯化的分析.可见一约40kDa的蛋白条带.ELISA法检测免疫小鼠的抗血清,结果显示3只小鼠均产生了较高滴度的抗体;Western-blot结果显示1号小鼠抗血清可以识别变性转移至NC膜上的野生型HIV-1 IN.结论 成功构建了pGEX-4T1-IN142-288质粒.在原核表达系统中表达的IN 142-288多肽抗原具有良好的抗原性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈君敏	福建医科大学附属第一医院血液风湿科	77	263	8.0	11.0
2	叶德富	福建医科大学附属第一医院血液风湿科	43	135	6.0	8.0
3	顾园园	福建医科大学附属第一医院血液风湿科	3	8	1.0	2.0