幽门螺杆菌VacA N端真核表达载体的构建、鉴定及其诱导巨噬细胞空泡化和凋亡的观察

• 作者: 于文 余敏君 刘志杰 张艳 黎村艳
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 幽门螺杆菌 空泡毒素 巨噬细胞 凋亡
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 352-355
• 页数: 4页
• 分类号: R378
• 字数: 3097字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2008.04.017

摘要

目的 构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)空泡毒素(Vacuolating cytotoxin,VacA)基因的真核表达载体pDsRed-Monomer-C1/vacA,并在THP-1巨噬细胞中表达,为研究VacA单一毒力决定簇的致病性奠定实验基础.方法 用Primer 5.0软件设计引物,以HP基因组为模板,PCR扩增vacA目的基因片段,克隆入真核表达载体pDsRed-Monomer-C1中,经酶切、PCR鉴定及测序鉴定后,转染 THP-1巨噬细胞中,荧光显微镜和Western-blot检测VacA蛋白在细胞中的表达;电镜观察巨噬细胞(MΦ)的空泡样变和凋亡;流式细胞仪检测细胞的凋亡率.结果 PCR扩增得到了大小约为1 428bp的目的片段,双酶切及测序鉴定证明成功构建了HP真核表达重组载体;转染后24h,重组质粒组部分细胞中有聚集的荧光颗粒,部分细胞发生空泡样变和凋亡改变;细胞凋亡率明显高于空质粒组和阴性对照组(P＜0.001),细胞核因子-κB(nuclear factor kappaB,NF-κB)的抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)抑制细胞的凋亡.结论 VacA蛋白瞬时高表达促进THP-1巨噬细胞空泡样变和凋亡.NF-κB可能参与调节VacA诱导的巨噬细胞凋亡.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余敏君	南华大学病原生物学研究所	104	491	11.0	17.0
2	张艳	南华大学病原生物学研究所	56	239	10.0	13.0
3	刘志杰	南华大学病原生物学研究所	7	13	2.0	3.0
4	于文	南华大学病原生物学研究所	9	20	2.0	4.0
5	黎村艳	南华大学病原生物学研究所	4	19	2.0	4.0