基于TaqMan探针的猪细小病毒实时荧光定量PCR方法的建立

• 作者: 刘金朋 崔保安 李新生 杨明凡 金钺 陈红英
• 来源期刊: 湖南农业大学学报(自然科学版)
• 学科: 农学
• 关键词: 猪细小病毒 检测 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产
• 页码范围: 686-689
• 页数: 4页
• 分类号: S852.65
• 字数: 3357字
• 语种: 中文

摘要

根据GenBank公布的猪细小病毒VP2基因序列,利用Premier express软件设计并合成了1对引物和1条相应的TaqMan探针,从猪细小病毒感染的PK-15细胞中提取DNA,经PCR扩增VP2基因,纯化的PCR产物克隆入pGEM-T Easy 载体中,构建重组质粒.转化大肠杆菌JM109,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为荧光定量PCR标准品模板建立标准曲线.在25 μL扩增反应体系中,对探针浓度、引物浓度、镁离子浓度和退火温度进行优化,建立了最佳的荧光定量PCR反应体系和扩增程序.该方法能够特异、定量检测猪细小病毒,灵敏度达1.12 TCID50/mL.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈红英	河南农业大学牧医工程学院	168	646	12.0	16.0
5	崔保安	河南农业大学牧医工程学院	274	2313	25.0	33.0
9	李新生	河南农业大学牧医工程学院	106	527	14.0	18.0
10	金钺	河南农业大学牧医工程学院	61	272	8.0	15.0
11	杨明凡	河南农业大学牧医工程学院	74	425	11.0	17.0
12	刘金朋	河南农业大学牧医工程学院	11	21	3.0	4.0