赤羽病病毒囊膜糖蛋白G1基因的截短表达、纯化及间接ELISA诊断方法的建立

• 作者: 吴东来 孙庆歌 张维军 徐树兰 王群 白宇 童铁钢 辛九庆
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 赤羽病病毒 囊膜糖蛋白 表达纯化 ELISA
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 562-567
• 页数: 6页
• 分类号: S188
• 字数: 5527字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2008.04.003

摘要

为获得赤羽病病毒(Akabane virus,AKAV)囊膜糖蛋白重组抗原作诊断应用研究,通过软件分析AKAV OBE-1株的囊膜糖蛋白G1的氨基酸序列,筛选出抗原性较好的基因片段G1-2作为目的片段,经RT-PCR扩增后,插入pMD18-T载体.经测序鉴定正确后,将该片段定向亚克隆于pET-28a(+)表达载体中,转化至BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达.经SDS-PAGE和Western blot分析,诱导表达产物以包涵体的形式存在,大小约为44 kD,且具有免疫学活性.亲和纯化后的融合蛋白浓度为2 mg/mL,纯度为92.6%.以该融合蛋白作为诊断抗原,建立了间接ELISA诊断方法.确定的抗原包被浓度为20μg/mL,血清最佳稀释度为1:200.交叉试验表明,该方法对牛常见的6种疾病阳性血清无交叉反应.应用该方法对病毒微量中和试验检测过的云南(77份)和内蒙(70份)牛血清样品进行了检测.以中和试验为参照,通过统计学处理,得出两地临界值分别为0.493和0.488,特异性为73%和86.9%,二者的符合率分别为80%和85.9%.