siNgR重组质粒载体构建及效应检测

• 作者: 叶剑 尹小磊 陈小璠 陈春林
• 来源期刊: 中华眼科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: RNA,小分子干扰 髓磷脂蛋白质类 受体,细胞表面 重组蛋白质类 视网膜神经节细胞 神经再生 质粒
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 244-247
• 页数: 4页
• 分类号: R77
• 字数: 2901字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0412-4081.2008.03.011

摘要

目的 构建具有特异阻断大鼠NgR基因功能的siRNA表达系统,为视神经损伤基因治疗提供新的方法 .方法 实验研究.根据Genbank提供的NgR基因mRNA序列,应用设计软件设计特异性的短链寡核苷酸,化学合成2对编码短发夹RNA的寡核苷酸序列,退火、克隆到经BglⅡ、Hind Ⅲ酶切处理的pSUPER-EGFP质粒,获得重组siNgR质粒,用EcoR Ⅰ和HindⅢ双酶切和序列测定对重组体进行鉴定,最后将构建的表达载体转染Wistar大鼠体内视网膜神经节细胞,免疫印迹法观察对NgR蛋白表达的影响.结果 重组siNgR表达载体的酶切鉴定结果 和测序结果 表明重组载体构建成功.视网膜冰冻切片后,经荧光显微镜观察,视网膜神经节细胞层和视神经纤维可见绿色荧光蛋白表达.免疫印迹法分析表明,siNgR-1和siNgR-2可抑制RGCs NgR蛋白的表达,而siNgR-c和pSUPER-EGFP对照对NgR蛋白的表达无明显影响.结论 成功构建了siRNA表达载体,此载体具有阻断NgR基因的表达的功能,为进一步研究视神经损伤基因治疗打下基础.(中华眼科杂志,2008,44:244-247)

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	叶剑	第三军医大学大坪医院野战外科研究所眼科	107	534	13.0	17.0
2	陈小璠	第三军医大学大坪医院野战外科研究所眼科	11	86	4.0	9.0
3	陈春林	第三军医大学大坪医院野战外科研究所眼科	14	79	5.0	8.0
4	尹小磊	第三军医大学大坪医院野战外科研究所眼科	16	48	4.0	5.0