HSV-1 UL30基因cDNA的克隆及筛选有效siRNA的融合载体构建

• 作者: 仁哲 何秋璟 刘秋英 张佩琢 张春龙 张美英 朱钦昌 王一飞
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: UL30基因/单纯疱疹病毒1型 分子克隆 EGFP 融合表达载体
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-4
• 页数: 4页
• 分类号: Q782
• 字数: 3694字
• 语种: 中文

摘要

目的:克隆HSV-1 U130 cDNA并测序,构建pEGFP-N1-Fi融合表达载体,为靶向UL30基因的siRNA的设计和筛选奠定基础.方法:从感染HSV-1 F株的病变VERO细胞提取总RNA,二次PCR扩增出UL30 cDNA并克隆至pEGFP-N1质粒,测序鉴定序列;将UL30 cDNA 4个小片段亚克隆至pEGFP-N1形成pEGFP-N1-Fi融合表达质粒,转染VERO细胞,荧光显微镜观察融合蛋白表达情况.结果:成功克隆出UL30 cDNA,序列对比显示与基因库中的HSV-1 F株UL30序列同源性为99.4%;成功构建pEGFP-N1-Fi融合表达载体并实现Fi-EGFP融合蛋白的表达.结论:成功克隆出UL30 cDNA,成功构建pEGFP-N1-Fi融合表达载体,为靶向UL30基因的siRNA的设计和筛选奠定基础.