巴马香猪CYP3A29 mRNA表达的TaqMan定量方法学建立

• 作者: 商海涛 杨婉身 杨家大 魏泓
• 来源期刊: 井冈山学院学报(自然科学版)
• 学科: 生物学
• 关键词: 巴马香猪 CYP3A29 TaqMan
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 57-62
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 5068字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-8085.2008.02.018

摘要

目的 建立巴马香猪CYP3A29 mRNA表达的TaqMan定量方法.方法 通过RT-PCR、TA克隆等技术制 备CYP3A29-pMD18-T和β-actin-pMD18-T实时荧光定量标准品,并以CYP3A29-pMD18-T标准品为模板,对不同浓度Mg2与探针组合的TaqMan反应体系进行筛选,TaqMan PCR方法,并对其有效性及重复性进行评价.结果 筛选到的TaqMan PcR方法为:PCR总体积10 μL,其中含1xBuffer、5.5 mmol/L Mg2、0.8 mmol/L dNTPmix、0.3 μmol/L上下游引物、0.2 U/μL rTaq、0.I μmol/L探针、1 μL模板.热循环条件为94℃5 min→40cycles(94℃15 s→60℃ 45 s→读板).结论 建立了有效测定巴马香猪CYP3A29 mRNA拷贝数浓度的TaqMan PCR方法.通过该方法分别定量CYP3A29和β-actin mRNA的拷贝数浓度,即可求出CYP3A29mRNA的表达水平.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨婉身	四川农业大学生命科学与理学院	54	858	16.0	27.0
2	商海涛	第三军医大学基础部	31	428	10.0	20.0
3	魏泓	第三军医大学基础部	242	2753	27.0	38.0
4	杨家大	井冈山大学医学院	8	28	3.0	5.0