siRNA表达载体介导靶向NADH-细胞色素b5还原酶基因的RNA干扰实验研究

• 作者: 兰风华 庄岳鹏 王水良
• 来源期刊: 中国优生与遗传杂志
• 学科: 医学
• 关键词: NADH-细胞色素b5还原酶 隐性先天性高铁血红蛋白血症 RNA干扰 小干扰RNA
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 分子、生化遗传与PCR技术
• 页码范围: 27-32
• 页数: 6页
• 分类号: R394.34
• 字数: 4689字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-9534.2008.03.010

摘要

目的 探索经载体介导的RNA干扰抑制人NADH-细胞色素b5还原酶(b5R)基因表达的可行性.方法 应用网络在线软件设计并合成两条针对b5R mRNA的RNA干扰的DNA模板片段,分别将其克隆至经过改建、带有neo基因的pSilencer1.0-U6载体上,构建成siRNA真核表达载体;脂质体转染法将上述重组质粒转入人肺成纤维细胞和BEL-7402肝癌细胞株.通过半定量RT-PCR和荧光定量RT-PCR分析,检测所构建的重组siRNA真核表达载体对b5R基因表达的干扰效应.结果 获得两个能在细胞内生成靶向b5R基因siRNA的重组栽体pSib5R-1和pSibSR-2;其中psib5R-2时成纤维细胞b5R mRNA的抑制率达81.7%,对BEL-7402细胞b5R mRNA的抑制率达60%.结论 两种细胞b5R基因的表达均可被载体介导的RNA干扰有效抑制;成功构建了针对b5R基因的siRNA表达载体,为建立稳定表达siRNA的、b5R酶缺陷的细胞模型提供了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	庄岳鹏	第二军医大学福州总院临床学院实验科	22	136	6.0	11.0
3	王水良	第二军医大学福州总院临床学院实验科	7	66	3.0	7.0
4	兰风华	第二军医大学福州总院临床学院实验科	4	5	1.0	2.0