rhTL1A基因原核表达载体的构建、表达与纯化

• 作者: 李树蕾 杨立彬 汪军 许淑芬 谭岩
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: TL1A 克隆,分子 原核表达 蛋白质纯化
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 415-419
• 页数: 5页
• 分类号: Q785
• 字数: 4438字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-587X.2008.03.015

摘要

目的:构建人肿瘤坏死因子样分子1A(TL1A)原核表达质粒并诱导其表达,纯化及鉴定目的蛋白.方法:人HUVECs总RNA经逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增TL1A基因,克隆到pTA2载体,酶切和测序鉴定正确后构建重组原核表达质粒pQE-TL1A,并转化大肠杆菌M15[pREP4].IPTG诱导目的蛋白表达并进行Western blotting鉴定;镍离子亲和层析柱(Ni2+-NTA)纯化靶蛋白.结果:目的基因经酶切其结果与预期相符,测序结果显示目的基因与GenBank登录的序列(登录号AF520785)完全一致;工程化大肠杆菌M15[pREP4]经IPTG诱导表达相对分子质量约22000的目的蛋白;Western blotting鉴定结果显示,重组蛋白能够与抗His单克隆抗体特异性结合.结论:成功地构建了重组原核表达质粒pQE-TL1A,并纯化获得高纯度重组TL1A蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谭岩	吉林大学第一医院中心实验室	135	608	9.0	17.0
2	杨立彬	吉林大学第一医院中心实验室	45	330	12.0	16.0
6	许淑芬	吉林大学第一医院中心实验室	37	200	6.0	13.0
7	李树蕾	吉林大学基础医学院组织与胚胎学教研室	45	277	10.0	14.0
8	汪军	吉林大学第一医院检验科	18	70	4.0	8.0