HIV多抗原位点同源序列合成基因的表达及活性鉴定

• 作者: 于湘晖 孙志伟 张煜 徐卉 杨怀宁 浦昀 赵大力
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 人免疫缺陷病毒 合成基因 基因表达 活性鉴定
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 221-225
• 页数: 5页
• 分类号: Q78|R4466|R51291
• 字数: 2497字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-587X.2008.02.013

摘要

目的:在原核表达载体系统中对HIV-1gp41/gp120和HIV-2gp125/gp36外膜蛋白多个抗原位点同源序列合成基因进行表达、纯化并鉴定其活性.方法:人工合成含HIV-1gp41的3个抗原位点、HIV-1gp120的2个抗原位点、HIV-2gp125的3个抗原位点和HIV-2gp36的1个抗原位点的串联基因,克隆到原核表达载体pRSETB中,构建重组表达质粒pRSETB-env,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的基因在大肠埃希菌BL21(DE3)中高效表达,采用金属离子亲和层析技术纯化表达蛋白,逐渐降低尿素浓度使目的蛋白复性,免疫印迹和ELISA法分别对表达产物进行鉴定.结果:目的基因在BL21中有较高表达率,纯化后表达蛋白经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)可见相对分子质量约44 000的蛋白带,与设计相对分子质量相符.免疫印迹、ELISA试验显示pRSETB-env质粒的HIV-1/2表达蛋白与HIV-1及HIV-2患者血清都能较好地结合,与其他患者血清无交叉反应.结论:成功构建了由HIV-1/2外膜蛋白多个抗原位点串联基因片段的表达载体pRSETB-env,并在原核细胞中高效表达,表达蛋白经纯化后纯度较高,并具有良好特异性和活性.