双孢蘑菇RAPD-PCR反应体系的优化

• 作者: 廖剑华 李寿崧 林媛 林河通 江树勋 王泽生 邵碧英 陈文炳
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 工学
• 关键词: 蘑菇 RAPD-PCR 体系优化
• 年，卷（期）: 2008,（10）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 428-432
• 页数: 5页
• 分类号: TS207|Q78
• 字数: 4245字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1002-6630.2008.10.099

摘要

本研究对6个影响双孢蘑菇RAPD-PCR反应的关键因素进行了一系列优化,目的在于建立理想的RAPD最佳反应条件和反应体系,为大量双孢蘑菇品种间的RAPD多样性分析做准备.各关键因素梯度设置如下:(1)7个退火温度梯度:33.5、36.5、38.3、40.1、43.7、45.4、48.1℃.(2)6个Mg2+浓度梯度:0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3mmol/L.(3)5个Taq酶用量梯度:0.5、1.0、1.5、2.0、2.5U.(4)5个dNTPs浓度梯度:0.10、0.15、0.20、0.25、0.30mmol/L.(5)5个引物浓度梯度:0.1、0.2、o.3、0.4、0.5lamol/L.(6)7个模板DNA用量梯度:100、20、4、0.8、0.16、0.032、Ong.实验结果表明:最佳的RAPD反应体系为:10×buffer 2.0μl、Taq酶1.5U、模板DNA4-100ng、MgCl2 2.0mmol/L、dNTP 0.20mmol/L,引物0.3μmol/L,加ddH20至20μl.PCR热循环参数为94℃预变性5 min;94℃变性lmin,44℃退火1min 50s,72℃延伸2min,循环40次;最后72℃延伸7min.