转化生长因子-βⅡ型受体特异性短发夹状RNA真核表达质粒的构建及鉴定

• 作者: 吕会增 周昌宁 张彩萍 曹海宁 王晖 郑宗珩 陈图峰 陈浩
• 来源期刊: 实用医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 瘢痕 shRNA TGF-βⅡ型受体
• 年，卷（期）: 2008,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1874-1876
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 字数: 2749字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2008.11.008

摘要

目的:针对转化生长因子-β(TGF-β)Ⅱ型受体基因的不同部位,构建不同TGF-βⅡ型受体特异性短发夹状RNA(shRNA)表达质粒载体,在转录后水平抑制TGF-βⅡ型受体的表达,对其克隆进行鉴定并挑选出抑制效率最高的克隆.方法:用DNA重组技术将针对人TGF-βⅡ型受体基因不同部位所设计的4对shRNA序列克隆到真核表达质粒 pSilencerTM3.1-H1 neo vector中,构建TGF-βⅡ型受体shRNA表达载体pSilencerTM3.1-H1-TGF-βRⅡshRNA1、2、3、4.脂质体介导转染成人原代成纤维细胞,经G418筛选抑制TGF-βⅡ型受体表达的稳定细胞克隆.结果:3个TGF-βⅡ型受体shRNA表达载体pSilencerTM3.1-H1-TGF-βRⅡ shRNA1、2、3经限制性酶切及序列分析证明基因插入正确.RT-PCR、Western blotting均证实3种shRNA重组质粒中pSilencerTM3.1-H1-TGF-βRⅡshRNA2可明显降低细胞内TGF-βⅡ型受体mRNA峰度及TGF-βⅡ型受体蛋白表达.结论:成功构建了TGF-βⅡ型受体shRNA表达载体pSilencerTM 3.1-H1-TGF-βRⅡ shRNA1、2、3,并筛选出特异而高效的阻断TGF-βⅡ型受体表达的克隆.此实验结果为进一步研究TGF-βⅡ型受体蛋白分子的生物学功能及应用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王晖		101	1546	19.0	36.0
2	陈浩		26	158	8.0	11.0
3	郑宗珩	中山大学附属第三医院胃肠外科	61	569	12.0	22.0
4	吕会增	中山大学附属第三医院胃肠外科	15	67	4.0	8.0
5	陈图峰	中山大学附属第三医院胃肠外科	17	39	4.0	5.0
6	周昌宁		2	2	1.0	1.0
7	曹海宁	中南大学口腔医学院	2	2	1.0	1.0
8	张彩萍		1	1	1.0	1.0