淋巴囊肿病毒实时定量PCR检测方法的建立和应用

• 作者: 周优 孙颖杰 岳志芹 应骏 梁成珠 汪东风 王哲 陈晓
• 来源期刊: 中国海洋大学学报(自然科学版)
• 学科: 农学
• 关键词: 淋巴囊肿病毒 实时定量PCR SYBR GreenⅠ 检测
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 253-258
• 页数: 6页
• 分类号: S941.41
• 字数: 4328字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-5174.2009.02.031

摘要

选取淋巴囊肿病毒(Lymphocystis disease virus,LCDV)主衣壳蛋白(MCP)基因保守序列,利用Primer Express2.0软件设计引物,通过优化反应条件,建立了SYBR GreenⅠ实时定量PCR的检测方法,并进行了敏感性、特异性分析.SYBR GreenⅠ实时定量PCR反应体系的最佳引物浓度为0.5 μmol/L,方法的检测限为30个病毒拷贝,扩增产物的Tm值为74.5 ℃.该方法对淋巴囊肿病毒有特异性,不能扩增流行性造血器官坏死病毒(EHNV)、虎纹蛙病毒(TFV)、蛙虹彩病毒(BIV)、新加坡石斑虹彩病毒(SGIV)、鳜鱼传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)及真鲷虹彩病毒(RSIV).对12份发病牙鲆鱼样品进行检测,均感染淋巴囊肿病毒;20份无临床症状的牙鲆经检测不含淋巴囊肿病毒.建立的LCDV的SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法,具有成本低、特异、灵敏、快速等优点,可用于淋巴囊肿病毒的早期诊断.