β-琼脂糖酶Ⅰ DagA的原核表达和活性鉴定

• 作者: 周雁胜 曲东 王保莉
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: β-琼脂糖酶Ⅰ dagA 原核表达 包涵体复性 生物活性
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 132-137
• 页数: 6页
• 分类号: S188
• 字数: 4074字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2009.01.022

摘要

采用PCR技术从假别单胞菌(Pseudoalteromonas atlantica)19262基因组DNA中获得β-琼脂糖酶Ⅰ基因(dagA)及去除信号肽的编码序列dagA(),分别与载体pET21a连接后转人大肠杆菌(Escherichia coli)ER2566中,共表达分子伴侣Ds-bC及FkpA,筛选出以包涵体为主要表达形式的高效表达体系:ER2566-pET21a-dagA()-DsbC菌株.包涵体蛋白达到菌体总蛋白的60%左右.包涵体用8mol/L尿素溶解、镍离子亲和层析纯化和梯度稀释复性.SDS-PAGE检测表明,复性后的DagA蛋白相对分子质量约为30.8 kD,且具有水解琼脂糖的生物活性.酶学特性分析表明,在pH 4.8～6.8范围内,DagA蛋白活性保持60%以上,最适pH 5.8;在温度37～60℃均有活性.最适温度为55℃.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曲东	西北农林科技大学资源环境学院	127	2554	25.0	45.0
2	王保莉	西北农林科技大学生命科学学院	54	665	15.0	24.0
3	周雁胜	西北农林科技大学生命科学学院	3	15	1.0	3.0