携带大鼠酪氨酸羟化酶基因慢病毒载体的构建及转染

• 作者: 吴秀丽 张志坚 张阳 郑明辉 陈东平
• 来源期刊: 解剖学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 酪氨酸羟化酶 慢病毒载体 基因克隆 骨髓间充质干细胞 转染
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 740-744
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4787字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-1633.2009.06.007

摘要

目的:构建携带增强绿色荧光蛋白(EGFP)和大鼠酪氨酸羟化酶(TH)基因的慢病毒载体,转染大鼠骨髓间充质干细胞(rMSC),观察TH基因的表达.方法:RT-PCR方法获得大鼠TH基因,将其克隆至慢病毒载体.通过瞬时转染法包装出病毒上清,鉴定滴度.感染rMSCs,荧光显微镜下观察EGFP的表达、转染效率,RT-PCR、免疫印迹法分别检测TH mRNA和蛋白的表达情况.结果:重组慢病毒载体质粒pNL-TH-IRES2-EGFP经双酶切鉴定正确,所获TH基因经测序后与GenBank报道序列完全一致;生产的病毒浓缩后滴度为4.1×10~7TU/ml;感染rMSCs结果显示荧光激发可见绿色荧光,TH-rMSCs、空载体-rMSCs组5d转染效率差异无统计学意义.RT-PCR、免疫印迹法显示TH基因成功在rMSCs中表达.结论:成功构建带有EGFP和大鼠TH基因的慢病毒载体,并获得TH-rMSCs基因工程细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张阳	福建医科大学生理学与病理生理学系	18	84	6.0	8.0
3	张志坚		78	420	11.0	16.0
9	吴秀丽		7	68	5.0	7.0
10	郑明辉		1	1	1.0	1.0
11	陈东平		2	4	1.0	2.0