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摘要:
目的 构建携带大鼠脑红蛋白(rat neuroglobin,rNGB)基因的慢病毒真核表达载体pLenti6/V5-rNGB,转染293细胞,观察外源性NGB在293细胞中的表达情况.方法 应用基因重组技术,从大鼠脑组织中获得rNGB基因片段,重组到pLenti6/V5慢病毒真核表达载体上.pLenti6/V5-rNGB经病毒包装,转染至293细胞,而后行rNGB Western blot和免疫细胞化学检测.结果 PCR扩增序列为456bpNGB基因,用Xho-Ⅰ和BamH-Ⅰ进行双酶切显示NGB序列已插入pLenti6/V5慢病毒表达载体,DNA序列鉴定进一步证实插入基因片段的正确性;293细胞转染pLenti6/V5-rNGB后荧光显微镜下发出绿色荧光,证实慢病毒表达载体转入包装细胞;进一步采取Western blot方法和免疫组化方法证实rNGB在包装细胞内有效表达,而pLEGFP-NI转染的细胞只检测到NGB蛋白微弱表达,两组比较有统计学差异(相对表达量分别为25.32±1.05、0,t=-39.63,P<0.01).结论 构建的pLenti6/V5-rNGB,经病毒包装转染至293细胞,rNGB和EGFP基因在细胞内有效表达,为pLenti6/V5-rNGB治疗相关疾病的实验研究奠定了基础.
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文献信息
篇名 构建携带大鼠脑红蛋白基因慢病毒载体及其目的基因高效表达
来源期刊 中华脑科疾病与康复杂志(电子版) 学科
关键词 转染 慢病毒属 脑红蛋白 病毒包装
年,卷(期) 2013,(4) 所属期刊栏目 基础研究
研究方向 页码范围 244-247
页数 4页 分类号
字数 3149字 语种 中文
DOI 10.3877/cma.j.issn.2095-123X.2013.04.006
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 周定标 解放军总医院神经外科 193 1382 18.0 26.0
2 尚爱加 解放军总医院神经外科 68 401 12.0 18.0
3 程诚 解放军总医院神经外科 8 47 4.0 6.0
4 冯兴军 解放军总医院神经外科 3 14 1.0 3.0
5 张月高 解放军总医院神经外科 1 0 0.0 0.0
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转染
慢病毒属
脑红蛋白
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期刊影响力
中华脑科疾病与康复杂志(电子版)
双月刊
2095-123X
11-9309/R
16开
北京市
36-378
2011
chi
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