构建携带大鼠脑红蛋白基因慢病毒载体及其目的基因高效表达

• 作者: 冯兴军 周定标 尚爱加 张月高 程诚
• 来源期刊: 中华脑科疾病与康复杂志（电子版）
• 关键词: 转染 慢病毒属 脑红蛋白 病毒包装
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 244-247
• 页数: 4页
• 字数: 3149字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3877/cma.j.issn.2095-123X.2013.04.006

摘要

目的 构建携带大鼠脑红蛋白(rat neuroglobin,rNGB)基因的慢病毒真核表达载体pLenti6/V5-rNGB,转染293细胞,观察外源性NGB在293细胞中的表达情况.方法 应用基因重组技术,从大鼠脑组织中获得rNGB基因片段,重组到pLenti6/V5慢病毒真核表达载体上.pLenti6/V5-rNGB经病毒包装,转染至293细胞,而后行rNGB Western blot和免疫细胞化学检测.结果 PCR扩增序列为456bpNGB基因,用Xho-Ⅰ和BamH-Ⅰ进行双酶切显示NGB序列已插入pLenti6/V5慢病毒表达载体,DNA序列鉴定进一步证实插入基因片段的正确性;293细胞转染pLenti6/V5-rNGB后荧光显微镜下发出绿色荧光,证实慢病毒表达载体转入包装细胞;进一步采取Western blot方法和免疫组化方法证实rNGB在包装细胞内有效表达,而pLEGFP-NI转染的细胞只检测到NGB蛋白微弱表达,两组比较有统计学差异(相对表达量分别为25.32±1.05、0,t=-39.63,P<0.01).结论 构建的pLenti6/V5-rNGB,经病毒包装转染至293细胞,rNGB和EGFP基因在细胞内有效表达,为pLenti6/V5-rNGB治疗相关疾病的实验研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周定标	解放军总医院神经外科	193	1382	18.0	26.0
2	尚爱加	解放军总医院神经外科	68	401	12.0	18.0
3	程诚	解放军总医院神经外科	8	47	4.0	6.0
4	冯兴军	解放军总医院神经外科	3	14	1.0	3.0
5	张月高	解放军总医院神经外科	1	0	0.0	0.0