不同类型载体携带Math1-EGFP基因对293T细胞转染效率及细胞毒性的研究

• 作者: 任丽丽 杨仕明
• 来源期刊: 中华耳科学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Math1 293T细胞 基因转染 基因载体 纳米材料
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 毛细胞再生与聋病基因治疗专辑
• 页码范围: 347-351
• 页数: 5页
• 分类号: R349.8
• 字数: 4980字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-2922.2009.04.020

摘要

目的 比较腺病毒、脂质体、纳米材料三种不同类型的载体携带目的 基因对293T细胞的转染效率及细胞毒性的大小,筛选理想的基因载体.方法 用重组腺病毒、Lipofectamine~(TM) 2000、Entranster~(TM)-D纳米材料为转染载体,携带含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的Math1-EGFP基因及真核表达质粒pRK5-Math1-EGFP,按照转染试剂盒说明优化其转染条件,分别转染293T细胞.24小时后在共聚焦显微镜下观察转染结果 并计数阳性细胞率,采用RT-PCR法检测转染细胞中Math1基因mRNA的表达,用MTT法检测不同转染条件下,不同转染载体对293T细胞的细胞毒性.结果 经优化转染条件,重组腺病毒载体转导的细胞中荧光蛋白表达几乎为95%以上,Lipofectamine~(TM) 2000、Entranster~(TM)-D纳米材料载体转染的细胞中荧光蛋白表达也分别达到70%和80%以上,而Entranste~(rTM)_-D纳米材料载体在最高转染效率的剂量下仍然保持80%以上的细胞生存率.RT-PCR进一步证实,三种载体转染细胞均有Math1基因mRNA的表达.结论 Entranster~(TM)-D纳米载体作为一种新型纳米聚合物转染试剂,能成功携带内耳基因治疗关键基因Math1基因转染293T细胞,并表现了低毒、高效性能.