肠上皮细胞中性氨基酸载体B0AT1的真核表达及稳定转染体系的建立

• 作者: 朱维铭 李宁 王斌 钮凌颖 黄骞
• 来源期刊: 肠外与肠内营养
• 学科: 医学
• 关键词: 中性氨基酸载体 肠上皮细胞 克隆 基因表达
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 289-293
• 页数: 5页
• 分类号: R329.2
• 字数: 3771字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-810X.2009.05.010

摘要

目的: 构建可表达人中性氨基酸载体B0AT1基因的真核表达载体,建立重组质粒转染的Hela细胞系,筛选出稳定表达人B0AT1的细胞株. 方法: 提取人正常小肠上皮细胞总RNA,采用RT-PCR方法扩增出B0AT1基因片段,EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切后,将其插入至真核表达载体pcDNA3.1中,构建重组表达质粒pcDNA3.1-B0AT1,转化E.coli DH5α菌株感受态细胞,将阳性克隆脂质体法转染Hela细胞,经G418筛选获得稳定表达株,用RT-PCR法检测B0AT1基因的mRNA表达. 结果: 从小肠上皮细胞中成功克隆到人B0AT1基因.酶切和序列测定表明已成功构建真核表达载体pcDNA3.1-B0AT1,将此重组质粒转染的Hela细胞,可稳定表达人B0AT1基因,并筛选出稳定表达B0AT1的Hela细胞系.氨基酸摄取实验证实,转染pcDNA3.1-B0AT1的Hela细胞具有B0AT1基因的生物学活性. 结论: 重组人中性氨基酸载体B0AT1克隆成功,并在Hela细胞中获得稳定表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李宁	南京军区南京总医院解放军普通外科研究所	390	6189	35.0	66.0
2	黄骞	南京军区南京总医院解放军普通外科研究所	18	45	5.0	6.0
3	朱维铭	南京军区南京总医院解放军普通外科研究所	149	1393	20.0	31.0
4	王斌	南京军区南京总医院解放军普通外科研究所	6	41	3.0	6.0
5	钮凌颖	南京军区南京总医院解放军普通外科研究所	7	66	3.0	7.0