乏氧/辐射双敏感启动子介导分泌型人TRAIL基因载体的构建及表达

• 作者: 曲雅勤 李艳博 杨艳明 贾晓晶
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 乏氧/辐射 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 基因重组
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 431-436
• 页数: 6页
• 分类号: Q78|Q691
• 语种: 中文

摘要

目的:构建乏氧(HRE)/辐射(Egr1)双敏感启动子介导的分泌型人TRAIL(shTRAIL)基因表达载体pcDNA3.1-HRE-Egr1-shTRAIL,观察乏氧和辐射对其表达的影响.方法:利用化学合成HRE上、下链,PCR扩增得到双链HRE;pMD19T-Egr1经Sac Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切得到Egr1;pshuttle-shTRAIL经Kpn Ⅰ和BarnH Ⅰ双酶切得到shTRAIL;利用基因重组技术构建含有HRE/Egrl双敏感启动子介导shTRAIL 的表达载体pcDNA3.1-HRE-Egr1-shTRAIL,经酶切、PCR和测序鉴定正确.肺腺癌A549细胞分为正常组、乏氧组(1%)、照射组(6 Gy)和乏氧加照射组;表达载体转染肺腺癌A549细胞,RT-PCR及ELISA法检测shTRAIL的表达.结果:BamH Ⅰ和Sma Ⅰ酶切,所得片段大小分别为1 284和4 998 bp、2 292和3 990 bp;以Egr1和shTRAIL引物PCR扩增该载体,得到469和820 bp产物;将pcDNA3.1-HRE-Egr1-shTRAIL进行测序,所得结果与设计一致,说明构建正确.转染肺腺癌A549细胞后,乏氧组、辐射组及乏氧加照射组shTRAIL mRNA和蛋白表达增加,与对照组比较差异有显著性(P＜0.05),且乏氧加照射组表达更明显.结论:成功地构建了乏氧/辐射双敏感启动子介导分泌型人TRAIL基因表达的载体pcDNA3.1-HRE-Egr1-shTRAIL;乏氧及照射能够诱导TRAIL表达增加,且二者具有协同作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李艳博	吉林大学公共卫生学院卫生部放射生物学重点实验室	60	244	9.0	13.0
2	曲雅勤	吉林大学第二医院放疗科	60	410	12.0	16.0
3	贾晓晶	吉林大学第二医院放疗科	45	168	8.0	11.0
4	杨艳明	吉林大学第二医院放疗科	24	81	4.0	8.0