猪伪狂犬病毒SYBR-Green Ⅰ实时定量PCR检测方法的建立

• 作者: 崔保安 李明凤 王学兵 贾艳艳 郭显坡 陈红英 魏战勇
• 来源期刊: 河南农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪伪狂犬病毒 SYBR-Green Ⅰ 实时荧光定量PCR 标准曲线
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医学
• 页码范围: 287-291,301
• 页数: 6页
• 分类号: S852.65
• 字数: 4437字
• 语种: 中文

摘要

利用PCR技术扩增出猪伪狂犬病毒gH基因中187 bp的片段,并克隆到pGEM T栽体上,纯化的质粒作为PCR检测的标准模板,以10倍梯度稀释质粒为标准模板,进行SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR扩增并制作标准曲线.建立了猪伪狂犬病毒的荧光定量PCR检测方法.该方法检测灵敏度可达1.26×102拷贝·μL-1,与猪圆环病毒,猪细小病毒,猪繁殖与呼吸综合征病毒,猪瘟病毒不发生交叉反应,具有良好的特异性和重复性;对15份疑似病料进行了检测.发现均为荧光定量PCR阳性,而常规PCR只能检测出6份阳性.结果表明,建立的实时荧光定量PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可用于临床PRV感染的检测.